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淋巴母細(xì)胞株是如何構(gòu)建成功的？
原載自：www.estasasalvo.com[行情動(dòng)態(tài)] 2020-05-13 瀏覽次數(shù)：1290
細(xì)胞株是通過(guò)選擇法或克隆形成法從原代培養(yǎng)物或細(xì)胞系中獲得具有特殊性質(zhì)或標(biāo)志物。細(xì)胞株的特殊性質(zhì)或標(biāo)志必須在整個(gè)培養(yǎng)期間始終存在。如果不能繼續(xù)傳代或傳代數(shù)有限，稱為有限細(xì)胞株（finitecell strain）；如果可以連續(xù)傳代，稱為連續(xù)細(xì)胞株（continuous cell strain）。對(duì)于人類腫瘤細(xì)胞，在體外培養(yǎng)半年以上，生長(zhǎng)穩(wěn)定，并連續(xù)傳代的即可稱為連續(xù)性株或系。
有關(guān)人類淋巴母細(xì)胞株的構(gòu)建：
1.4ml肝素抗凝血于離心管中，加入2ml RPMI 1640；
2.混勻后沿管壁緩慢加到預(yù)置有4ml淋巴細(xì)胞分離液的液面上靜置30min；
3.1500rpm，15min，吸取白細(xì)胞層于另一離心管中；
4.加RPMI 1640 5ml洗滌白細(xì)胞兩次；
5.將白細(xì)胞接種至1ml RPMI 1640培養(yǎng)基中，加入10μl環(huán)胞霉素和100μl的EB（EB病毒）液，混勻；
6.水浴搖床，40次/分，37℃，3hr；
7.1500rpm，15min。將細(xì)胞接種至1ml培養(yǎng)基中（內(nèi)含谷氨酰胺1mM／ml）加入10μl環(huán)胞霉素，輕輕混勻，37℃培養(yǎng)；
8.待5天后觀察細(xì)胞轉(zhuǎn)化和生長(zhǎng)情況，決定是否半量換液。一般半量換液l—2次，并維持環(huán)胞霉素的濃度；
9.待轉(zhuǎn)化細(xì)胞數(shù)量明顯上升，并出現(xiàn)細(xì)胞團(tuán)塊后，可轉(zhuǎn)入25ml細(xì)胞培養(yǎng)瓶中，加1—2ml培養(yǎng)基，37℃培養(yǎng)10—15天，一般每隔3—4天觀察一次，決定是否換液、傳代；
10.細(xì)胞生長(zhǎng)達(dá)一定數(shù)量后凍存，凍存前應(yīng)進(jìn)行核型分析和存檔。
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